Molecular Cell Biology

　　课程编号：1823061                     

　　课程名称：细胞分子生物学

　　实验学分：0.5                      

　　实验学时：16

　　适用专业：动物医学（含动物医学方向、检验检疫方向、实验动物方向）

实验名称与学时安排

实验一、大肠杆菌感受态细胞制备（3学时）

　　实验性质：验证性实验。

　　实验内容：大肠杆菌液体培养，细菌培养物OD600值测定，CaCl2溶液配制，感受态细菌制备与保存。

　　目的与要求：了解大肠杆菌感受态细胞制备基本原理，掌握感受态细胞制备方法。

　　注意点：制备感受态细菌的培养物OD600值应为0.4左右。

实验二、质粒DNA制备（3学时）

　　实验性质：验证性试验。

　　实验内容：大肠杆菌液体培养，碱裂解法制备质粒DNA，DNA浓度测定。

　　实验目的和要求：掌握质粒DNA制备和浓度测定的基本原理和方法。

　　注意点：过分变性可使非超螺旋质粒比例增加和质量下降，质粒DNA浓度测定的准确性取决于OD260/OD280比值。

实验三、DNA限制性酶消化与电泳分析（3学时）

　　实验性质：验证性实验。

　　实验内容：反应体系建立，反应产物琼脂糖凝胶电泳，凝胶染色，图像分析系统使用。

　　实验目的和要求：掌握限制酶消化DNA基本原理与方法，琼脂糖凝胶电泳操作，凝胶染色。

　　注意点：酶与DNA比例，不同限制酶消化温度，电泳条件与分离速度关系，溴乙锭污染。

实验四、DNA片段连接、转化及重组子鉴定（4学时）

　　实验性质：综合性实验。

　　实验内容：连接反应体系建立，连接产物细菌转化，转化菌培养观察。

　　实验目的和要求：了解粘端和平端DNA片段连接条件差异、重组菌蓝-白斑筛选原理及感受态细菌制备方法，掌握连接反应体系建立和热休克法细菌转化方法。

　　注意点：载体与目的片段的比例，连接产物与感受态细菌的比例，转化时间的控制。

实验五、聚合酶链式反应（3学时）

　　实验性质：综合性实验。

　　实验内容：反应体系建立，扩增程序编制，反应产物电泳分析。

　　实验目的和要求：了解PCR扩增反应的基本原理和影响产物扩增特异性的因素，掌握反应体系建立和程序编制方法。

　　注意点：各种成分的浓度及比例，引物退火温度，防污染措施。

　　实验教材：

　　1、陈宏等主编，《基因工程实验技术》，农业出版社，2006年

执笔：孙怀昌  张鑫宇